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關(guān)于徠卡顯微鏡工作方法的說(shuō)明

更新時(shí)間:2014-05-26      點(diǎn)擊次數(shù):663
     徠卡顯微鏡一個(gè)非常重要的問(wèn)題是在取材和分離細(xì)胞過(guò)程,冰凍干燥和樹(shù)脂包埋(FD)后冰凍超簿團(tuán)片后,冰凍干燥后細(xì)跑各部位65元素成分含量中必須處理十分仔細(xì),絕不能損傷待觀察分析的細(xì)胞。因?yàn)樽鱴線微區(qū)分析不但步驟繁多,而且成本甚高,如果經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間及多步驟的處理后,所分析的細(xì)胞是受損傷的細(xì)胞或死細(xì)胞,得出錯(cuò)誤的結(jié)論是非常遺憾的。如經(jīng)過(guò)膠元酶處理分離出的心肌細(xì)胞有兩種形態(tài),一種是長(zhǎng)桿狀,另一種是圓形。后者是在細(xì)胞分離過(guò)程中受損傷的瀕死細(xì)胞。
 
    徠卡顯微鏡這兩種細(xì)胞中電解質(zhì)的含量及分布十分不同。圓形心肌細(xì)胞中Na甚高而K極低,線枝體中的ca濃度十分高。經(jīng)過(guò)與其它分析方法核對(duì),證明圓形細(xì)胞高Na低K及線粒體內(nèi)高ca是由于在細(xì)胞分離過(guò)程中細(xì)胞膜受損傷的結(jié)果。細(xì)胞及組織的冰涼固定方法往往是先采取淬冷固定,然后放入液氮中保存。淬冷固定對(duì)于保存的效果十分重要。活細(xì)胞或新鮮組織中富含水分,當(dāng)淬冷時(shí)往往是細(xì)胞或組織與碎冷劑(特別是用液氮粹冷時(shí))直接接觸的部位先冷凍固定,因而形成一個(gè)“殼”,便妨礙了細(xì)胞的中心部位碎冷固定。因此在作x一線微區(qū)分析時(shí),常常發(fā)現(xiàn)較大的細(xì)胞的中心部位有冰晶存在。為了防止這種情況發(fā)生,便使用熔點(diǎn)比液氮高但低干一806c的物質(zhì)作碎冷劑。這類物質(zhì)很多,但zui易獲得,價(jià)格低廉的是濃態(tài)丙烷(沸點(diǎn)一42.120c,熔點(diǎn)一187.10c,分子量44.1),冷卻速度也zui快。但其缺點(diǎn)是易燃。
 
    徠卡顯微鏡可將肌纖維放在一特制的架上,使該肌纖維收縮達(dá)到某時(shí)相需要固定時(shí),立即啟動(dòng)噴咀,使液態(tài)丙烷向肌纖維噴射,使之淬冷固定。然后再將肌纖維連同架子取出投入液氮中。如果固定血細(xì)胞或分離的細(xì)胞,首先低速離心使細(xì)胞集中,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一個(gè)導(dǎo)熱性能良好的銀質(zhì)小管中、將該小管放入液態(tài)丙烷中獰冷固定。Hall實(shí)驗(yàn)室固定大鼠胰腺時(shí),先將兩鋼塊用液氦(或液氮)預(yù)冷,用鉗夾住兩銅塊將其放在胰腺前后,使姨腺淬冷固定。組織或細(xì)胞淬冷固定后轉(zhuǎn)移到液氮中可*保存。
 
    徠卡顯微鏡有聚光鏡的顯微鏡則可將聚光鏡作上下移動(dòng)使其亮度適中,另外也可以改變可變光闡的孔徑以達(dá)到適中9b亮度。如果光線太陽(yáng)時(shí),則可將聚光鏡作適當(dāng)?shù)南蛏仙勺児怍[的孔徑作適當(dāng)?shù)姆糯蟆H绻饩€太強(qiáng)則可將聚光鏡作適當(dāng)?shù)南陆担山还忾c的孔徑作適當(dāng)?shù)臏p小。假如在這種情況下還感到刺眼,那末可選用適當(dāng)?shù)臑V光片放置在聚光鏡下的托架上。這柞就能獲得使你滿意的亮度。當(dāng)然在調(diào)節(jié)聚光鏡的上下位置利可變光閱的孔徑大小以及選用適合的濾光片,那是要經(jīng)過(guò)一定時(shí)期的實(shí)踐而取得經(jīng)驗(yàn)的。
 
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