使用奧林巴斯CX33顯微鏡觀察野生線蟲時(shí)，需遵循規(guī)范的操作流程并關(guān)注關(guān)鍵細(xì)節(jié)，以確保觀察效果并保護(hù)設(shè)備。以下是具體步驟與注意事項(xiàng)：

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

顯微鏡檢查與調(diào)試

將CX33顯微鏡放置在穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)上，稍微向左傾斜，距離平臺(tái)邊緣約7厘米，確保穩(wěn)定性。

檢查各部件是否完好，包括目鏡、物鏡（通常配備4×、10×、40×物鏡，觀察線蟲建議使用10×或40×）、光源模塊及電源線。

打開LED光源，調(diào)節(jié)亮度至適中（建議從低亮度開始逐步增加），避免光線過強(qiáng)導(dǎo)致線蟲應(yīng)激或觀察不適。

樣本制備

線蟲固定：野生線蟲需先麻醉以減少運(yùn)動(dòng)干擾。常用方法包括：

化學(xué)麻醉：將線蟲置于含0.1% Levamisole（左旋咪唑）或5mM NaN?的M9緩沖液中，麻醉時(shí)間約5-10分鐘。

低溫麻醉：將載玻片置于冰上短暫冷卻（需控制時(shí)間，避免線蟲死亡）。

制片：

在載玻片上滴加適量線蟲懸浮液（如M9緩沖液中的線蟲溶液）。

覆蓋蓋玻片時(shí)，先讓一側(cè)接觸液滴，緩慢放下另一側(cè)以避免氣泡產(chǎn)生。

用吸水紙從蓋玻片邊緣吸去多余液體，防止樣本移動(dòng)。

二、顯微鏡操作步驟

低倍鏡定位

旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，將10×物鏡對(duì)準(zhǔn)光孔（物鏡前端與載玻片保持約2cm距離）。

調(diào)節(jié)粗調(diào)焦旋鈕，使載物臺(tái)緩慢上升，直到物鏡接近蓋玻片（注意觀察物鏡，防止接觸）。

左眼注視目鏡，反向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦旋鈕，使載物臺(tái)緩慢下降，直到視野中出現(xiàn)線蟲輪廓。

輕微轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)焦旋鈕，使圖像更清晰，同時(shí)移動(dòng)載物臺(tái)（通過X-Y旋鈕）找到目標(biāo)線蟲。

高倍鏡觀察

在低倍鏡下將目標(biāo)線蟲調(diào)整至視野中心后，旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，切換至40×物鏡。

由于高倍鏡下視野變暗，需適當(dāng)增加光源亮度，并調(diào)節(jié)孔徑光闌（向左或向右移動(dòng)光闌拉桿，使其指針與物鏡放大倍率匹配），以優(yōu)化對(duì)比度和分辨率。

使用微調(diào)焦旋鈕精細(xì)對(duì)焦，觀察線蟲的形態(tài)細(xì)節(jié)（如體壁、消化道、生殖腺等結(jié)構(gòu)）。

關(guān)鍵觀察要點(diǎn)

形態(tài)特征：野生線蟲通常體長(zhǎng)約1mm，直徑約50μm，需觀察其整體形態(tài)（如彎曲程度、體表光滑度）及內(nèi)部器官結(jié)構(gòu)。

運(yùn)動(dòng)行為：若未麻醉，線蟲可能呈現(xiàn)緩慢蠕動(dòng)或擺動(dòng)，需記錄其運(yùn)動(dòng)模式（如波浪式前進(jìn)、頭部擺動(dòng)頻率）。

對(duì)比度優(yōu)化：通過調(diào)節(jié)孔徑光闌或使用相差環(huán)（若配備相差物鏡），增強(qiáng)線蟲與背景的對(duì)比度，便于觀察透明結(jié)構(gòu)。

三、注意事項(xiàng)與優(yōu)化技巧

避免樣本損傷

麻醉劑濃度和時(shí)間需嚴(yán)格控制，避免線蟲死亡或形態(tài)改變（如體腔膨脹）。

蓋玻片壓力要均勻，防止壓碎線蟲或產(chǎn)生人工偽影。

設(shè)備保護(hù)

操作物鏡轉(zhuǎn)換器時(shí)，避免用手直接握住物鏡旋轉(zhuǎn)，防止物鏡松動(dòng)或損壞。

使用高倍物鏡（如40×）時(shí)，需先在低倍鏡下定位，再切換至高倍鏡，防止物鏡與載玻片碰撞。

圖像記錄

若需保存觀察結(jié)果，可連接數(shù)碼相機(jī)或圖像采集系統(tǒng)（通過C接口連接三目鏡筒），調(diào)整相機(jī)參數(shù)（如曝光時(shí)間、白平衡）后拍攝清晰圖像。

拍攝時(shí)保持顯微鏡穩(wěn)定，避免手部震動(dòng)導(dǎo)致圖像模糊。

四、應(yīng)用場(chǎng)景

形態(tài)學(xué)研究：觀察野生線蟲的種屬特征（如口針形狀、尾端結(jié)構(gòu)），輔助分類鑒定。

行為學(xué)分析：記錄線蟲在特定環(huán)境（如不同溫度、化學(xué)物質(zhì)刺激）下的運(yùn)動(dòng)響應(yīng)，研究其應(yīng)激機(jī)制。

教學(xué)示范：通過實(shí)時(shí)觀察線蟲形態(tài)與行為，幫助學(xué)生理解無脊椎動(dòng)物生物學(xué)特性。